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白介素Elisa試劑盒操作步驟

更新時(shí)間:2017-04-19      瀏覽次數(shù):2150
    白介素Elisa試劑盒操作步驟:
 
   實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37溶解);試劑或樣品配制時(shí)均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
 
1、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
 
2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100(臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37溫育1小時(shí)。
 
3、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可拍將孔內(nèi)液體拍干)。
 
4、每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100,加上覆膜,37溫育1小時(shí)。
 
5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
 
6、每孔加底物溶液90,酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
 
7、每孔加終止溶液50,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
 
8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
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