液體樣本甘油含量酶法測(cè)定試劑盒如何正確使用！

描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo)，但檢測(cè)更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法，通過比色法測(cè)定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后，操作步驟更加簡單，檢測(cè)線性范圍在10-1200µmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 ：  

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標(biāo)準(zhǔn)品1 ml

4 oC，儲(chǔ)存3個(gè)月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計(jì)。最佳工作波長550nm，如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。

 操作步驟：

一 樣本處理：

酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測(cè)定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測(cè)定。

培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，如有細(xì)胞碎片應(yīng)4oC,，12,000g離心5min,取上清進(jìn)行測(cè)定。

血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g離心5min得到血漿；非抗凝血，先4oC靜置2h得到血清后，2000g離心10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g離心10min ,取上清測(cè)定或-20oC保存。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合，立即使用或4oC保存<1天，變色棄去。

三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。

四 甘油濃度測(cè)定：

參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過線性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。）

37oC或25oC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管OD值。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

表一：

  酶標(biāo)微板測(cè)定的加樣比例（檢測(cè)范圍10-1200µmol/L）

      （可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整）

 表二：

1 ml比色杯測(cè)定的加樣比例（檢測(cè)范圍10-1200µmol/L）

 本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！