免疫印跡Western Blot檢測-上海信帆生物

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蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot ) ，簡稱WB ，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結(jié)合，用特異性的一抗結(jié)合目標(biāo)蛋白，用HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細(xì)胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù)，常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。



WB實(shí)驗(yàn)代測原理： 1、WB實(shí)驗(yàn)代測采用的是聚丙烯先胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針"是抗體，“顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯先胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
2、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

以上是小編為大家講解的原理，那么小編接下來進(jìn)一步講解基本過程有哪些？

二：WB實(shí)驗(yàn)代測基本過程：
1、獲取細(xì)胞或組織裂解物。
2、根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer。
3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準(zhǔn)確性。
4、蛋白定量。
5、電泳分離蛋白質(zhì)。
6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。

以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容，希望對(duì)大家有所幫助。

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