農(nóng)殘固化酶速測(cè)技術(shù)及應(yīng)用研究

更新時(shí)間：2023-06-01

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植物酯酶（plant’esterase,P-E）與動(dòng)物膽堿酯酶（choliniesterase,ChE）一樣，酶活性可被有機(jī)磷（OP5）和氨基甲酸酯農(nóng)藥所抑制，植物酯酶（P—E）可以水解醋酸萘酯為萘酚和醋酸，萘酚與顯色劑固藍(lán)B鹽反應(yīng)生成紫紅色偶氮化合物，從而完成顯色反應(yīng)。一旦植物酯酶活性被農(nóng)藥所抑制，就不能完成顯色反應(yīng)，表明樣品中含有農(nóng)藥。本研究使用固化的植物酯酶代替通常使用的動(dòng)物膽堿酯酶。酶來(lái)源于市售面粉，向面粉中按1：5（w／v）比例加入蒸餾水，在振蕩器上振蕩30min，以5000r／min離心20min，上清液經(jīng)濾紙過(guò)濾、濾液作為原酶液保存在4℃冰箱（或?qū)⒚敢悍盅b后在真空冷凍干燥機(jī)上凍干成酶干粉、冰凍保存），使用前稀釋至一定倍數(shù)作為酶的工作液。取聚苯乙烯微孔反應(yīng)板，用移液槍向每孔中加酶工作液20μL，使其均勻涂于孔壁，室溫下（或4℃冰箱）自然涼干后用無(wú)離子水沖洗3次，涼干、室溫干燥避光保存。微孔內(nèi)壁固定有植物酯酶的塑料板稱(chēng)為農(nóng)藥酶檢測(cè)器。采用梯度稀釋法在蒸餾水中分別配制1000μg／L、100μg／L、50μg／L、10μg／L、1μg／L的系列濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，在農(nóng)藥檢測(cè)器上分別進(jìn)行抑制試驗(yàn)，待反應(yīng)完成后，用肉眼觀察顯色結(jié)果，確定可分辨出的zui低標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度結(jié)果證明靈敏度為10～100μg／L。稱(chēng)取不含農(nóng)藥的小白菜、蘋(píng)果各2g，分別向其表面添加不同濃度農(nóng)藥，室溫下涼干后，經(jīng)20％甲醇提取后進(jìn)行抑制試驗(yàn)，觀察可分辨出的zui低農(nóng)藥濃度，可得檢出限為0.1～1.Omg／kg。將農(nóng)藥檢測(cè)器、顯色劑、基質(zhì)等組裝成農(nóng)藥殘留檢測(cè)試劑盒。試劑盒與同類(lèi)方法比較zui主要的區(qū)別有三點(diǎn)：一是試劑盒使用的是植物酯酶代替同類(lèi)方法使用的乙酰膽堿酯酶（AchE）或丁酰膽堿酯酶（BuchE），酶源廣泛廉價(jià)易得：二是試劑盒使用的是固定化酶而不是同類(lèi)方法使用的酶溶液，抗干擾力強(qiáng)；三是試劑盒使用20％甲醇作為蔬菜樣品的提取溶液而不是磷酸緩沖液或水，提取效率有所提高。試劑盒只用于有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥檢測(cè)，檢出結(jié)果只是反應(yīng)出這兩類(lèi)農(nóng)藥的綜合殘毒指標(biāo)。它檢出的陰性樣品不表示不含有其它農(nóng)藥或低于檢測(cè)限的有機(jī)磷和／或氨基甲酸酯農(nóng)藥。

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