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免疫組化染色試劑盒怎么使用-上海信帆為您答疑解惑

更新時(shí)間:2018-12-06      瀏覽次數(shù):1252

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存儲(chǔ)條件:2~8℃暗處保存。
試劑盒內(nèi)容:
試劑A(無色液體):10ml/kit封閉用正常羊血清原液(含有15mM NaN3)
試劑B(黃色液體):1ml/kit生物素化二抗原液(IgG/Bio)
 SPN:生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
 SPN:生物素標(biāo)記羊抗小鼠IgG
試劑C(橙色液體):1ml/kit辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素原液(S-A/HRP)
標(biāo)本染色:1. 石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
2. 3%過氧化氫孵育5~10分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
3. 蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步后進(jìn)行)。
4. 5~10%正常羊血清(PBS稀釋)室溫孵育10~15分鐘,傾去,勿洗。
5. 滴加適當(dāng)比例的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜。
6. PBS沖洗,3分鐘×3次。
7. 滴加生物素標(biāo)記的二抗(1%BSA-PBS稀釋),如1:100稀釋,則37℃孵育10分鐘;1:300稀釋,則37℃孵育30分鐘. 
8. PBS沖洗,3分鐘×3次。
9. 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(稀釋和使用方法同二抗)
10. PBS沖洗,3分鐘×3次。
11. 顯色劑顯色(DAB或AEC)。
12. 自來水充分沖洗,復(fù)染,封片。

 

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