植物過氧化氫DAB染色液的使用方法

使用方法

1. 試劑準(zhǔn)備：將100 mg DAB以磷酸緩沖液100 mL充分溶解，得到DAB染色工作液，避光4℃保存，一周內(nèi)有效。注：DAB對(duì)光敏感，溶解過程需要避光，如果較難溶解，可通過超聲、磁力攪拌等方法促進(jìn)溶解。

2. 采集經(jīng)脅迫（例如重金屬）的植物幼苗或根尖，純水稍洗凈，置于濾紙上吸干多余的水分。將植物幼苗或根尖浸沒在DAB染色工作染液中，常溫避光染色2-6 h，至陽性部位出現(xiàn)深棕色，其余部位近無色或者呈植物本身的顏色即可。（根據(jù)植物幼嫩程度、顯色程度調(diào)整染色時(shí)間）

3. 用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出，浸入純水中來回漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素，脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。

4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片，浸入純水中來回漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，將樣本轉(zhuǎn)入適量DAB樣本保存液中浸泡30 min，隨后可取出拍照。樣本可置于該保存液中常溫保存一周。

注意事項(xiàng)

1. DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周內(nèi)使用。存放時(shí)間過久，會(huì)影響顯色。

2. 因過氧化氫容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物應(yīng)激產(chǎn)生過氧化氫，因此植物樣本需要新鮮采集，并盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對(duì)照組。

3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結(jié)果。

4. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。

植物過氧化氫DAB染色液的使用方法