CM-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法

CM-瓊脂糖凝膠FF是一種將羧甲基鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的帶有弱酸陽(yáng)離子基團(tuán)的層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有離子交換容量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)，廣泛用于蛋白質(zhì)、核酸、多肽及多糖等的生物大分子實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備和生物制藥、生物工程的工業(yè)化制備。

使用方法：

　　1. 裝柱

　　1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

　　1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用初始緩沖液（按凝膠:緩沖液=3:1的比例）配成勻漿并脫氣。

　　1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。

　　1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

　　1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2 ~ 3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

注意：

1)所有操作過(guò)程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。

2)如無(wú)條件做1.2，填料層有氣泡，可進(jìn)行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。

3)乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

　　2. 平衡

　　將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。

　　3. 上樣

　　切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：除鹽，置換緩沖液，澄清過(guò)濾（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 沖洗

　　用2 ~ 3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未交換的組分被清洗出去。

　　5. 洗脫

　　離子交換柱的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫，一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進(jìn)行。

　　6. 再生

　　用高鹽濃度的緩沖液（含1 ~ 2mol/L NaCl）按操作流速?zèng)_洗3 ~ 5個(gè)柱體積，接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個(gè)柱體積。

　　若有失活蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

　　7. 在位清洗(CIP)

　　對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類(lèi)物質(zhì)，可采用以下流程進(jìn)行在位清洗：1 mol/L NaOH洗2個(gè)柱體積，8 mol/L尿素洗2個(gè)柱體積， 30%異丙醇洗2個(gè)柱體積，平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。

　　在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。如需要去除內(nèi)毒素?zé)嵩?，可以?0 cm/h速度下，1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2h。

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