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信帆生物:引物合成文獻(xiàn)上線

更新時(shí)間:2025-02-25      瀏覽次數(shù):57

信帆生物:引物合成文獻(xiàn)上線

《 LncRNA PSMA3-AS1調(diào)節(jié)miR-186-5p/SOX4軸對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響》

摘要: 目的 探索長鏈非編碼RNA人蛋白酶體α亞基3型的反義RNA1(long non?coding RNA PSMA3?AS1,lncRNA PSMA3?AS1)對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響以及對微小RNA?186?5p(microRNA?186?5p,miR?186?5p)/性別決定區(qū)Y框蛋白4(sex determining region Y box protein 4,SOX4)軸的調(diào)控機(jī)制。方法 利用LipofectamineTM 3000試劑將si?PSMA3?AS1及其陰性對照、miR?186?5p inhibitor及其陰性對照分別轉(zhuǎn)染至人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH?SY5Y中,隨機(jī)分為Control組(未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒)、si?NC組(轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1陰性對照)、si?PSMA3?AS1組(轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1)、si?PSMA3?AS1+miR?NC組(共轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor陰性對照)、si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組(共轉(zhuǎn)染si?PSMA3?AS1和miR?186?5p inhibitor)。采用qRT?PCR法檢測各組細(xì)胞中PSMA3?AS1、miR?186?5p和SOX4 mRNA的表達(dá)水平;Western blot檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中SOX4蛋白的表達(dá)水平。采用CCK?8法、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。采用生物信息學(xué)方法預(yù)測和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR?186?5p與PSMA3?AS1和SOX4之間的靶向關(guān)系。結(jié)果 相較于Control組和si?NC組,si?PSMA3?AS1組細(xì)胞中的PSMA3?AS1表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均降低(均P<0.001)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,PSMA3?AS1能靶向負(fù)調(diào)控miR?186?5p,而miR?186?5p能靶向負(fù)調(diào)控SOX4。敲低PSMA3?AS1后細(xì)胞的miR?186?5p表達(dá)水平升高,而SOX4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低(均P<0.001)。回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),相較于si?PSMA3?AS1+miR?NC組,si?PSMA3?AS1+miR?186?5p inhibitor組SOX4 mRNA及蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均升高(均P<0.001),而miR?186?5p表達(dá)水平降低(P<0.001)。結(jié)論 敲低PSMA3?AS1可能通過調(diào)節(jié)miR?186?5p/SOX4軸抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲行為。

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