elisa試劑盒的夾心法，是一種很常規(guī)的檢測(cè)方法。它是怎么樣工作的，原理，操作又是如何呢？？

1。在檢測(cè)之前，兩種抗體都應(yīng)該被純化，并且必須被標(biāo)記。
2。對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用程序，一個(gè)聚氯乙烯（PVC）微孔板是的；然而，參考制造商的指南來(lái)決定蛋白質(zhì)的結(jié)合板的zui合適的類型。
三.每口井加入約50μL抗體溶液（PBS中的20μg/L），將未標(biāo)記的抗體與每個(gè)井的底部結(jié)合。聚氯乙烯將綁定約100納克/井（300毫微克/平方厘米）。使用的抗體的數(shù)量將取決于個(gè)別化驗(yàn)，但如果需要zui大結(jié)合，使用至少1μg /井。這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于能力的井，但綁定將發(fā)生更迅速，并結(jié)合溶液可以保存和再次使用
4。培養(yǎng)板在4°C允許完整的結(jié)合。
5。用PBS清洗酶標(biāo)板兩次。500毫升噴瓶方便?？贵w溶液沖洗可以把板在合適的容器中刪除。
6。其余位點(diǎn)的蛋白結(jié)合在微孔板必須用封閉液孵育飽和。用3%的威爾斯/ PBS與0.02%*填充到頂部。孵化2小時(shí)通宵在室溫空氣潮濕。
注意：*是一種抑制劑或辣根過(guò)氧化物酶。如果HRP標(biāo)記的抗體將用于檢測(cè)，不包括*在緩沖液或洗滌溶液中。
7。用PBS清洗酶標(biāo)板兩次。
8。添加50μL抗原解酶標(biāo)板（抗原溶液應(yīng)滴定）。所有的稀釋液應(yīng)在緩沖完成（3%牛血清白蛋白/ PBS）。放置至少2小時(shí)，在潮濕空氣中室溫
9。用PBS洗盤子四次。
10、添加標(biāo)記的第二抗體。在初步實(shí)驗(yàn)中可以確定添加量。為了準(zhǔn)確定量，第二抗體應(yīng)過(guò)量使用。所有的稀釋液應(yīng)在緩沖了。
11。潛伏在潮濕的氣氛中室溫2小時(shí)或更多。
12、用PBS的幾種變化清洗。
13、添加基材如制造商指示。經(jīng)過(guò)建議的孵育時(shí)間已經(jīng)過(guò)去，在目標(biāo)波長(zhǎng)的光學(xué)密度，可以測(cè)量在ELISA板閱讀器。
注意：由于潛在致癌性，一些酶底物被認(rèn)為是有害的。妥善處理，并參考材料安全數(shù)據(jù)表，以妥善處理預(yù)防措施。