白介素10（IL-10)ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作

更新時(shí)間：2017-09-19

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　　白介素10（IL-10)ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作

　　白介素10（IL-10)ELISA試劑盒檢測(cè)之前需要做哪些準(zhǔn)備工作？下面就讓小編帶您做個(gè)簡(jiǎn)單的了解。

　　1.試劑盒自冰箱中取出后應(yīng)置室溫平衡20分鐘；每次檢測(cè)后剩余試劑請(qǐng)及時(shí)于2～8℃保存。

　　2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

　　3.標(biāo)準(zhǔn)品:加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.25ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品瓶中使IL-1β終濃度達(dá)到250pg/ml，靜置15分鐘后輕輕混懸待*溶解，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測(cè)孔中。（標(biāo)準(zhǔn)曲線取七個(gè)點(diǎn)，zui高濃度為250pg/ml,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接加入作為0濃度.）

　　白介素10（IL-10)ELISA試劑盒洗滌方法:

　　自動(dòng)洗板機(jī)或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。zui后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程需自備的材料：

　　1.不同規(guī)格的加樣槍及相應(yīng)的槍頭；2.酶標(biāo)儀；3．自動(dòng)洗板機(jī)；4．去離子水或雙蒸水；

　　白介素10（IL-10)ELISA試劑盒操作步驟:

　　1.通過(guò)計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時(shí)用不到板條請(qǐng)放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

　　2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔,設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔)加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育120分鐘。對(duì)于血清或血漿標(biāo)本，請(qǐng)加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本，如稀釋量大，請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。

　　4.洗板5次，且zui后一次置厚吸水紙上拍干。

　　5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育60分鐘。

　　6.洗板5次，且zui后一次置厚吸水紙上拍干。

　　7.加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　8.洗板5次，且zui后一次置厚吸水紙上拍干。

　　9.加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　10.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測(cè)量OD450值。

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