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液體樣本甘油酶法測(cè)定試劑盒

液體樣本甘油酶法測(cè)定試劑盒,甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能夠水解血液中的甘油三酯。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-10-07
  • 訪  問(wèn)  量:1010
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詳細(xì)介紹

液體樣本甘油酶法測(cè)定試劑盒

描述:甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能夠水解血
液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素
敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂
肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo),
但檢測(cè)更加方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經(jīng)典的
GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)方法,通過(guò)比色測(cè)定液體樣本中的甘
油含量。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后,操作步驟更加簡(jiǎn)單,檢測(cè)線性范圍在
10-1200µmol/L,可靠性和重復(fù)性俱佳,適合生物醫(yī)學(xué)、食
品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
原理:ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,
再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過(guò)氧化氫;在過(guò)氧化物酶作用
下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正
比。
適用范圍:測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘
油濃度。
組成 :(以 250 次為例)
(1) R1 試劑 40 ml
(2) R2 試劑 10 ml
(3) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml
4 oC 保存,6 個(gè)月有效
所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光
光度計(jì)。最佳工作波長(zhǎng) 550nm,如無(wú)此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用
570nm、次選 530、490nm
一 樣本處理:
1. 酒類、飲品、清澈液體樣本:可直接進(jìn)行測(cè)定,如超過(guò)
線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
2. 培養(yǎng)液:取不含酚紅、無(wú)顏色、無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)基,
如有細(xì)胞碎片應(yīng) 4oC,,12,000g 離心 5min,取上清進(jìn)行測(cè)
定。
3. 血液:對(duì)于新鮮抗凝血而言,可 4oC2,000g 離心 5min
得到血漿;而對(duì)于非抗凝血來(lái)說(shuō),可先 4oC 靜置 2h
到血清后,2000g 離心 10min,除去血細(xì)胞。將得到的血
漿/血清 70oC 加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶,12,000g
離心 10min ,去上清進(jìn)行測(cè)定或-20oC 保存。
二 工作溶液配制:4:1 比例,取 4 ml 試劑 R1 1 ml
R2 混合即可,立即使用或 4oC 保存<1 天,變色棄去。
三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致
的液體,將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為 1000、500、
250125、62.531.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常
取其中 4~6 管即可,注意設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
四 甘油濃度測(cè)定:
1. 參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致,減小實(shí)驗(yàn)

誤差,可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品,然后再加入工作溶


液。(注意:當(dāng)甘油濃度較低時(shí),可將待測(cè)樣品與工作
溶液按照 100µl:100µl 體積進(jìn)行混合,然后再進(jìn)行測(cè)定,
但是如果樣品體積超過(guò) 100µl 時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶
的濃度,致使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過(guò)
線性范圍的時(shí)候,可進(jìn)行適當(dāng)稀釋,然后根據(jù)稀釋倍數(shù)
來(lái)計(jì)算樣品中甘油濃度。)
2. 37oC 25oC 反應(yīng) 15 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘
內(nèi)穩(wěn)定。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,然后測(cè)定各管 OD
值。
4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。
Excel 作圖步驟:各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸,標(biāo)準(zhǔn)品濃
度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),點(diǎn)擊做圖向?qū)?,選
-散點(diǎn)圖-,點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一
點(diǎn),點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-,點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,點(diǎn)擊-顯示公式-
-R 2值-。
表一:
酶標(biāo)微板測(cè)定的加樣比例(檢測(cè)范圍 10-1200µmol/L
(可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整)

image.png

參考文獻(xiàn):
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145

液體樣本甘油酶法測(cè)定試劑盒





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